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腺病毒包裝

Adenovirus Packaging

重組腺病毒（AdV）是一種複制缺陷的腺病毒載體系統，在基因治療、基礎生命科學研究等領域被廣泛應用。目前常用的腺病毒載體基于人腺病毒5型（Ad5），其基因組是36 kb長的線性雙鏈DNA。腺病毒可通過自身的纖維（fiber）和細胞表面的受體結合被內吞進入細胞，然後從內吞體（endosome）轉移到細胞質和細胞核內，借助細胞的轉錄和翻譯機器啓動病毒的複制組裝。一個完整的病毒生活周期會引發細胞死亡從而釋放出病毒粒子。

腺病毒特點

感染範圍廣

腺病毒可適用于普通細胞系的感染，也可用于懸浮細胞、原代細胞等。

感染效率高

腺病毒的滴度可高達10¹¹PFU/ml，感染效率高，可感染懸浮細胞、原代細胞等。

載體容量大

腺病毒的載體容量較大，最高可達8kb。

当前產品與服務
服務流程
質量標准
載體選擇
客戶評價
常見問題
感染實例
發表文獻

腺病毒当前產品與服務

服務類型	提供当前產品	滴度	適用範圍
常規基因過表達/幹擾腺病毒 miRNA sponge/antago腺病毒 circRNA/LncRNA過表達和幹擾腺病毒 CRISPR/Cas9腺病毒定制腺病毒純化服務腺病毒現貨当前產品	普通腺病毒	10¹⁰PFU/ml或10¹¹PFU/ml	適用于普通細胞系感染
		懸浮細胞專用腺病毒Ads	10¹⁰PFU/ml或10¹¹PFU/ml	專爲懸浮細胞特殊設計，兼容普通細胞和原代細胞，效率更高

服務流程

質量標准

檢測項目	檢測方法	檢測結果
支原體	PCR	陰性
內毒素	LAL	合格
細菌	培養法	陰性
真菌	培養法	陰性
活性滴度	感染法	≥10^10 PFU/ml

載體選擇（常用）

編號	調控方式	元件順序	原核抗性	真核抗性	荧光標記	啓動子
Adeasy014	過表達	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-EGFP	Kanamycin	無	EGFP	EF1
Adeasy015	過表達	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-mCherry	Kanamycin	無	mCherry	EF1
Adeasy018	過表達	pAdEasy-CMV	Kanamycin	無	無	CMV
Adeasy022	過表達	pAdEasy-CMV-3flag	Kanamycin	無	無	CMV
Adeasy023	過表達	pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-EGFP	Kanamycin	無	EGFP	EF1
Adeasy024	過表達	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-LUC	Kanamycin	無	Luciferase	EF1
Adeasy027	過表達	pAdEasy-EF1-MCS-CMV-eRFP	Kanamycin	無	eRFP	EF1
Adeasy030	過表達	pAdEasy-EF1-MCS-3flag-CMV-mCherry	Kanamycin	無	mCherry	EF1
Adeasy032	過表達	pAdeasy-EF1-CircRNA-CMV-EGFP	Kanamycin	無	EGFP	EF1
Adeasy019	幹擾	pAdEasy-U6	Kanamycin	無	無	U6
Adeasy020	幹擾	pAdEasy-U6-CMV-EGFP	Kanamycin	無	EGFP	U6
Adeasy021	幹擾	pAdEasy-U6-CMV-mCherry	Kanamycin	無	mCherry	U6
Adeasy028	幹擾	pAdEasy-U6-CMV-eRFP	Kanamycin	無	eRFP	U6
Adeasy026	Cas9/gRNA	pAdEasy-U6-CMV-Cas9-2A-eRFP	Kanamycin	無	eRFP	U6
Adeasy043	Cas9/gRNA	pAdEasy-U6-scaffold-CMV-Cas9-T2A-ZsGreen	Kanamycin	無	ZsGreen	U6

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客戶評價

南京醫科大學趙同學

因爲目的基因比較大，所有困擾了很久，在實驗室學姐的推薦下嘗試了漢恒的腺病毒，果然沒有讓我失望，我的大基因也成功感染了，而且效果很不錯！

腺病毒感染Pan02，MOI=100

厦門大學林同學

和漢恒的合作真的很愉快，從售前到售後都能感覺到工作人員的專業和負責，解答了我很多的疑惑，回複消息也很快，高效溝通真的很節約時間成本。

腺病毒感染CHO，MOI=30

上海交通大學醫學院附屬仁濟醫院孫同學

一開始自己構建質粒做過表達，但是都失敗了，最後還是找漢恒做了腺病毒，沒想到效果這麽好！也幫我解答了很多的困難，最後成功檢測過表達。真是幫了大忙了！

腺病毒感染H9C2，MOI=70

常見問題

感染細胞，腺病毒和慢病毒該怎麽選擇？

主要根據實驗目的不同來選擇，可以參考以下幾個方面來判斷：

（1）插入目的序列的大小：慢病毒載體包裝容量一體建議在3k以內，超過可能會影響病毒滴度；腺病毒包裝容量可達8k；若目的序列大小超過載體容量，滴度則會隨着目的序列大小增加而降低；

（2）是否需要構建穩轉細胞株：慢病毒載體可以將外源基因隨機整合到目的細胞基因組中並穩定遺傳，即可用于構建穩轉細胞株，當然做瞬時轉染也可以；而腺病毒不整合基因組，只適用于瞬時轉染；

（3）目的細胞類型：像神經細胞、一些原代細胞等感染難度比較大的細胞，且後續無需建立穩轉株，推薦使用腺病毒，其感染效率要遠高于慢病毒。

詳細可參考：基因調控工具選擇指南>>

腺病毒包裝系統AdMax和Adeasy的區別？

腺病毒載體的包裝系統主要有兩種：AdMax系統和Adeasy系統。這兩種包裝系統都是二質粒系統，即需要一個骨架質粒和一個攜帶外源基因的穿梭質粒；都需要能夠表達E1基因的293A細胞作爲包裝細胞，另外293A細胞爲單層細胞有利于空斑的形成和觀察。AdMax和Adeasy的主要區別在于病毒基因組重組的過程不同：

AdMax系統：病毒基因組重組過程簡單，骨架質粒和穿梭質粒直接轉染至293A細胞中重組即可。

Adeasy系統：該系統是在細菌中進行的。首先骨架質粒整合到BJ5183感受態細胞中，再將穿梭質粒線性化後轉化到BJ5183，二者則在BJ5193中重組，驗證重組效果後，轉至Stbl3感受態細胞大量制備重組質粒，再線性化後，即可轉入包裝細胞進行包毒。

腺病毒可以感染動物嗎？

純化的腺病毒滴度可達滴度可達到10¹¹PFU/ml，可以用于動物實驗。

腺病毒是否需要純化，純化方式是什麽？

未純化的病毒液中含有缺損病毒顆粒、細胞碎片、培養基等雜質，當被注入動物體內，會引免疫反應，所以在需要做動物實驗時，通常需要對腺病毒進行純化。而進行細胞實驗，可使用未純化的腺病毒。

詳情可以參考幹貨文章《動物實驗用腺病毒是否有必要純化？》

漢恒生物推薦采用PEG8000沉澱-CsCl密度梯度離心-透析聯用法進行腺病毒純化。

腺病毒感染實例

腺病毒感染貼壁細胞

腺病毒轉染

自噬腺病毒轉染

mRFP-GFP-LC3自噬雙標腺病毒感染HCT116和HT29，漢恒客戶2017年發表于CELL，IF＞30

腺病毒感染原代細胞

腺病毒用于動物實驗

腺病毒純化的滴度可達到10¹¹PFU/ml，用于動物實驗。

腺病毒用于動物實驗

小鼠眼部結膜下注射純化腺病毒Ad-SIRT1和對照AdGFP：PFU=10¹¹/ml，3 μl/single eye；48hr後觀察GFP表達。

客戶發表文獻節選

Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy

（雜志:CELL，IF=41.582，上海交通大學附屬仁濟醫院）

Local hyperthermia therapy induces browning of white fat and treats obesity

（雜志:CELL，IF=41.582，華東師範大學）

TRIB3 Promotes APL Progression through Stabilization of the Oncoprotein PML-RARa and Inhibition of p53-Mediated Senescence

（雜志:Cancer Cell，IF=31.743，中國醫學科學院）

An ALOX12–12-HETE–GPR31 signaling axis is a key mediator of hepatic ischemia–reperfusion injury

（雜志:NATURE MEDICINE，IF=30.641，武漢大學）

WWC proteins mediate LATS1/2 activation by Hippo kinases and imply a tumor suppression strategy

（雜志:MOLECULAR CELL，IF=17.970，複旦大學兒童醫院）

E3 ubiquitin ligase RNF5 protects against hepatic ischemia reperfusion injury by mediating PGAM5 ubiquitination

（雜志:HEPATOLOGY，IF=17.425，鄭州大學第一附屬醫院）

SIRT3 Acts As a Negative Regulator of Autophagy Dictating Hepatocyte Susceptibility to Lipotoxicity

（雜志:HEPATOLOGY，IF=17.425，浙江大學）

atg7-Based Autophagy Activation Reverses Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity

（雜志:Circulation Research，IF=17.367，北京中醫藥大學）

Protective effect of HINT2 on mitochondrial function via repressing MCU complex activation attenuates cardiac microvascular ischemia–reperfusion injury

（雜志:Basic Research in Cardiology，IF=17.165，複旦大學附屬中山醫院）

AKAP1 Deficiency Attenuates Diet-Induced Obesity and Insulin Resistance by Promoting Fatty Acid Oxidation and Thermogenesis in Brown Adipocytes

（雜志:Advanced Science，IF=16.806，空軍軍醫大學）