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自噬監測工具

Autophagy Research

細胞自噬（Autophagy）是指細胞內非必需的或功能紊亂的組分通過溶酶體降解成氨基酸、脂質、糖等基礎營養物質的過程。自噬既是細胞應對極端環境的一種特殊手段，也是調控細胞正常生命活動的重要機制，自噬異常往往也是引起細胞損傷和老化的重要因素。目前已知，自噬參與了腫瘤、衰老、炎症、免疫應答、心腦血管疾病、氧化應激、神經退行性疾病、代謝、發育等許多重要的生物學過程。

漢恒当前產品特點：

權威性高

漢恒自噬雙標腺病毒榮登CELL主刊；

現貨全

多種自噬相關基因病毒及工具病毒現貨；

種類多

提供慢病毒、腺病毒、腺相關病毒以及質粒

LC3雙標病毒
自噬簡介
監測標准
監測工具
客戶評價
常見問題
發表文獻

主流自噬監測工具-LC3雙標病毒：

当前產品編號	当前產品名稱	当前產品規格
HB-AP210 001	自噬雙標腺病毒	1mL（10¹⁰PFU）
HB-LP210 0001	自噬雙標慢病毒	1mL（10⁸TU）
HB-AVP210 0001	自噬雙標腺相關病毒	1mL(10¹²v.g)

自噬簡介：

自噬（Autophagy），是指溶酶體中的水解酶非特異地降解細胞質中蛋白質、細胞器等底物的過程，它同時還受複雜信號精細調控，研究比較清楚的自噬通路有PI3K-I和PI3K-III、mTOR等。自噬過程一般分爲三個階段：自噬起始階段、自噬小體形成階段、自噬溶酶體階段。它參與着腫瘤、衰老、炎症、免疫應答、心腦血管疾病、氧化應激、神經退行性疾病、代謝、發育等重要生物學過程。自噬研究的切入角度：通常除了研究自噬本身，更多的是把自噬作爲一個機制來研究，如自噬如何參與腫瘤的發生發展、自噬如何參與腫瘤的耐藥性、自噬如何參與炎症反應、自噬如何參與氧化應激、甚至自噬如何參與自閉症、阿爾茲海默症的發生與治療等

自噬通路和相關基因

調控自噬的主要信號通路和相關基因

自噬監測的黃金標准：

1、LC3剪切的變化

2、電鏡直接觀察到自噬囊泡

3、荧光蛋白標記的LC3監測自噬流

自噬監測標准

衡量自噬的三個“黃金標准”，分別是LC3的翻譯後加工及脂化修飾（圖A）、利用電鏡直接觀察自噬小體和自噬溶酶體的多少、荧光蛋白標記的LC3監測自噬流（圖B）。

漢恒生物自噬監測工具：

主流自噬示蹤工具一：mRFP-GFP-LC3 自噬雙標腺病毒（現爲mCherry-eGFP-LC3）

自噬雙荧光監測原理

雙荧光指示體系原理

mRFP 用于標記及追蹤LC3，GFP 的減弱可指示溶酶體與自噬小體的融合形成自噬溶酶體，即由于GFP 荧光蛋白對酸性敏感，當自噬體與溶酶體融合後GFP 荧光發生淬滅,此時只能檢測到紅色荧光。

我們在顯微鏡成像後紅綠荧光merge後通過merge後出現的黃色斑點即只是自噬體.紅色的斑點指示自噬溶酶體,通過不同顔色斑點的計數可以清晰的看出自噬流的強弱。

如下圖:細胞轉染mRFP-GFP-LC3病毒後給予氨基酸剝奪處理2小時後出現明顯增強的自噬以及自噬流。

mRFP-GFP-LC3 自噬雙標腺病毒

紅色且沒有綠色的斑點代表自噬溶酶體（mRFP），黃色斑點代表自噬小體（RFP+GFP），（由于GFP 荧光蛋白對酸性敏感，當自噬體與溶酶體融合後GFP 荧光發生淬滅,此時只能檢測到紅色荧光）

Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy.

漢恒客戶2017年發表于CELL，IF>30.

LC3当前產品列表

工具	当前產品類別	提供類型
mcherry-GFP-LC3	LC3自噬雙標	慢病毒/腺病毒/AAV
GFP-LC3	LC3自噬單標
mCherry-LC3	自噬單標

更多請去自噬当前產品List查看>>

主流定位示蹤工具二：p62

p62自噬監測工具

U2OS用GFP-p62和LC3-RFP同時標記。然後用60 μM 氯喹處理16hr。可以觀察到二者有着明顯的共定位。（當誘導自噬時，GFP-p62融合蛋白被招募到自噬小體上，呈現綠色小點。如果此時加入氯喹抑制自噬流，那麽GFP-p62就會累積在自噬小體和自噬溶酶體上）

p62当前產品列表

当前產品名稱	默認規格
過表達p62慢病毒	108TU/ml，1ml
過表達p62腺病毒	1010PFU/ml，1ml
過表達p62腺相關病毒	1012v.g/ml，1ml
過表達P62質粒	5ug

選擇性自噬定位工具: Keima探針

Keima自噬定位探針

Keima探針研究核糖體選擇性自噬的基本原理

常見問題

自噬LC3單標病毒和雙標病毒在應用上有什麽區別？什麽時候用單標什麽時候用雙標?

自噬單標對于監測自噬體的形成較爲有用，但不利于自噬流的整個過程進行動態檢測，比如無法精確監測溶酶體是否參與，也無法示蹤自噬體的成熟過程等。

如果想觀察自噬流最好是用雙標。

自噬雙標病毒如何使用？

自噬病毒当前產品的細胞感染，和其他慢病毒/腺病毒当前產品類似，您購買後，會給您提供相應的病毒操作說明。請您根據操作說明進行細胞感染實驗，建議您在正式實驗前摸索細胞MOI值，以便于達到更優的感染效果。

對于在體自噬流監測，您根據需要感染的組織/器官選擇合適的注射方式和注射體積。

自噬流如何統計？

在顯微鏡成像後，紅綠荧光merge後出現的黃色斑點即只是自噬體，紅色的斑點指示自噬溶酶體，通過不同顔色斑點的計數可以清晰的看出自噬流的強弱：一般統計采用人爲計數的方法，也就是統計叠加（overlay）之後黃色斑點和紅色斑點的數目，然後做出 bar 圖。

客戶發表文獻節選：

Fusobacterium nucleatum Promotes Chemoresistance to Colorectal Cancer by Modulating Autophagy

（雜志:CELL，IF=41.582，上海交通大學附屬仁濟醫院）

atg7-Based Autophagy Activation Reverses Doxorubicin-Induced Cardiotoxicity

（雜志:Circulation Research，IF=17.367，北京中醫藥大學）

PIWIL2 interacting with IKK to regulate autophagy and apoptosis in esophageal squamous cell carcinoma

（雜志:Cell death and differentiation，IF=15.828，四川大學華西醫院）

USP11 regulates autophagy-dependent ferroptosis after spinal cord ischemia-reperfusion injury by deubiquitinating Beclin 1

（雜志:Cell Death & Differentiation，IF=15.828，南京醫科大學第一附屬醫院）

Nanoprodrug ratiometrically integrating autophagy inhibitor and genotoxic agent for treatment of triple-negative breast cancer

（雜志:Biomaterials，IF=12.479，浙江大學醫學院第二附屬醫院）