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環狀RNA(circRNAs)是一類不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、並以共價鍵形成環形結構的非編碼RNA分子。circRNA是區別于傳統的線性RNA,具有閉合環狀結構,大量存在于真核轉錄組中。大部分的環狀RNA是由外顯子序列構成,在不同的物種中具有保守性,同時存在組織及不同發育階段的表達特異性。
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漢恒生物研發了一款高效成環過表達載體系統。該載體可用來轉染哺乳動物細胞,可高效表達circRNA並促使其高效成環。
技術特點:
1)人巨細胞病毒的CMV啓動子可以高效表達目的circRNA;
2)上下遊成環元件Front circ-signal和Back circ-signal可以高效促使表達的circRNA環化;
3)線性化的載體非常方便目的circRNA直接無縫克隆,極大降低無關序列參與成環的幾率。
近幾年的研究表明circRNA富含miRNA結合位點,能在細胞中起到了miRNA海綿(miRNA sponge)的作用。circRNA通過對miRNA的吸附進而解除miRNA對其靶基因的抑制作用,升高靶基因的表達水平,這一作用機制被稱爲競爭性內源RNA(ceRNA)機制。研究circRNA的調控機制需要先找到與cirRNA相互作用的miRNA,而荧光素酶報告基因實驗可以用來證明miRNA與circRNA相互作用
1)circRNA過表達和幹擾質粒構建
2)circRNA過表達和幹擾病毒包裝
3)基于慢病毒技術的穩定細胞系構建服務
4)circRNA和靶基因的荧光素酶驗證服務
5)circRNA精確成環驗證
6)ceRNA機制研究服務
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