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無縫克隆試劑盒

無縫克隆技術是一種新的、快速、簡潔的克隆方法，可以在質粒的任何位點進行一個或多個目標DNA的片斷的插入，而不需要任何限制性內切酶和連接酶。突破傳統的雙酶切再加上連接，只需要一步重組法，即可得到高效率克隆的重組載體，大大提高了工作效率。

漢恒生物研發的Easy Cloning無縫克隆試劑盒操作極其簡單，僅需在載體的克隆位點進行線性化，並在插入片段 PCR 引物的 5’端引入與載體克隆位點兩端完全一致的 15~25 bp 同源序列。將上述線性化的克隆載體和帶有同源序列的 PCR 片段按合適比例混合，並加入 Easy Cloning Master mix，通過反應體系中 DNA外切酶、DNA聚合酶以及連接酶的在 50℃反應 20 min 即可快速完成定向克隆，陽性率幾近 100%。

無縫克隆特點：

操作簡單且快速

可以不需要任何限制性內切酶、連接酶，也不需要磷酸化、末端補平等操作；體系反應時間，僅需20min

應用廣泛

可同時連接多個DNA片段，最多可達10個

精確高效

不附加任何多余序列，精確定向連接，陽性率高

無縫克隆原理：

在基因克隆的引物設計及目的DNA片段的擴增階段，與常規PCR法是相同的。唯一的差異在于載體末端和引物末端應具有15-20個同源堿基，由此得到的PCR產物兩端便分別帶上了15-20個與載體序列同源性的堿基。

無縫克隆技術原理

Easy Cloning無縫克隆原理示意圖

無縫克隆與傳統克隆對比：

傳統克隆	無縫克隆
PCR引物設計需引入載體上的酶切位點， PCR產物再經過酶切、膠回收、連接後定向克隆到目的載體上；或進行TA載體連接	只需要一次反應即可完成定向克隆，省略酶切、酶連等過程
需要查找合適的酶切位點，購買各種內切酶	對酶切位點無要求，可以把目的片段插入到任意載體的任意位點
陽性率低	連接片段之間不會引入任何其他序列
多個片段，通常只能分多次拼接	可以同時克隆多個片段

Easy Cloning無縫克隆試劑盒当前產品包裝：

貨號	当前產品組成	使用次數	體積
HB-EC-20T	2 x Easy Cloning Master mix	20 tests	200uL
	Positive linearized pUC vector （250 ng）	5 tsets	25uL
	Positive control insert (500 ng)	5 tsets	25uL
	儲存條件	-20℃